牛A型巴氏杆菌抗体elisa试剂盒 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 规格:96T 使用目的: 本试剂盒用于测定牛血清、血浆及相关液体样本中牛A型巴氏杆菌抗体(A-Pasteurella Ab)表达。 试剂盒组成 1 | 30倍浓缩洗涤液 | 20ml×1瓶 | 7 | 终止液 | 6ml×1瓶 | 2 | 酶标试剂 | 6ml×1瓶 | 8 | 阳性对照 | 0.5ml×1瓶 | 3 | 酶标包被板 | 12孔×8条 | 9 | 阴性对照 | 0.5ml×1瓶 | 4 | 样品稀释液 | 6ml×1瓶 | 10 | 说明书 | 1份 | 5 | 显色剂A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2张 | 6 | 显色剂B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1个 |
标本要求 1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤 - 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)
- 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,
- 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
- 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
- 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
- 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
- 温育:操作同3。
- 洗涤:操作同5。
- 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
- 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
- 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算和结果判定: 试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10 临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15 阴性判定:样品OD值< 临界值(CUT OFF)者为牛病毒性腹泻抗体(BVDV Ab)阴性 阳性判定:样品OD值≥ 临界值(CUT OFF)者为牛病毒性腹泻抗体(BVDV Ab)阳性 牛A型巴氏杆菌抗体elisa试剂盒程序总结:  注意事项 1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。 2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。 3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 5.底物请避光保存。 6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为630nm 7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸,使用时必须注意安全。 保存条件及有效期 1.试剂盒保存:;2-8℃。 2.有效期:6个月 注意: 1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓,避免起泡。 2. 洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。 3. 一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。 5. 如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请zui后乘以稀释倍数。 6. 在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,不能混淆。 7. 底物请避光保存。 8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。 |