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2026-02-02
引言血管生成（Angiogenesis）是内皮细胞在特定刺激下形成新血管的过程，在生理性组织修复和病理性肿瘤生长中均发挥关键作用。体外血管生成实验（如成管实验）通过模拟体内微环境，评估内皮细胞（如人脐静脉内皮细胞HUVEC）的成管能力，为研究血管生成机制、药物筛选及疾病治疗提供重要手段。本文详细介绍血管生成实验的标准操作流程，并解析常见问题及解决方案。实验材料准备1.细胞与培养基细胞选择：推荐使用人脐静脉内皮细胞（HUVEC），因其具有干细胞潜能，传代次数可达50-60次，且...2026-01-22
什么是ELISA？ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种检测血液中特定物质的实验室方法。对于艾滋病检测，它专门寻找HIV抗体——身体感染HIV病毒后产生的特殊蛋白质。艾滋病ELISA检测如何工作？1.准备阶段将HIV病毒的部分蛋白质（抗原）固定在塑料板上这些抗原就像"磁铁"一样等待结合HIV抗体2.检测阶段加入患者血液样本如果存在HIV抗体，就会与板上的抗原结合加入酶标记的"检测抗体"（能识别HIV抗体）加入特殊化学物质，如果存在HIV抗体就会产生颜色变化3.结果读取颜色越深，...2026-01-14
一、血清的收集与处理采集方法血清是通过静脉采血获得的，采血后血液在无抗凝剂条件下自然凝固，析出的淡黄色液体即为血清。采血时需使用无菌技术，避免溶血，因为溶血会释放具有过氧化物酶活性的物质，导致ELISA等检测方法出现非特异性显色反应，影响结果准确性。处理流程凝固与离心：采血后，血液在室温下静置30分钟至1小时，待完-全凝固。随后以2500-3000转/分钟离心5-10分钟，分离血细胞与血清。保存条件：血清应分装保存于-20°C或-80°C，避免反复冻融。短期保存可置于4°C，...2026-01-05
一、操作因素1.灭菌不彻-底高压蒸汽灭菌参数错误：温度、压力或时间未达标（如121℃未维持15分钟），导致耐热孢子存活。灭菌后冷却不当：过早打开灭菌锅或未充分冷却，引发冷凝水污染。灭菌物品超载：过多培养基或容器堵塞灭菌锅，影响蒸汽穿透。2.无菌操作失误超净台污染：紫外灯未定期更换、气流紊乱或操作者动作过大，带入环境微生物。操作前未消毒：手部、工具或容器表面未用酒精擦拭，直接接触培养基。培养基暴露时间过长：在开放环境中倾倒或分装，增加污染风险。三、接种技术问题接种量控制不当：菌...2025-12-11
固定化酶技术通过物理或化学方法将酶束缚于载体上，使其能重复使用且易于分离。常见的四种方法及其优缺点如下：1.吸附法含义：利用物理吸附力（如范德华力、氢键）或离子交换作用，将酶吸附在固体载体（如活性炭、多孔玻璃）表面。优点：操作简单、条件温和，酶活力损失少，载体可重复使用。缺点：结合力较弱，易受pH、温度或离子强度影响而解吸附，导致酶泄漏。2.共价结合法含义：通过共价键将酶蛋白的非必需侧链基团（如氨基、羧基）与载体表面的功能基团偶联。优点：结合非常牢固，酶不易脱落，稳定性好，可...2025-12-05
细胞自噬与凋亡是两种重要的细胞程序性死亡方式，它们之间存在复杂的交互调控网络，共同决定细胞的最终命运。一、交互作用方式协同促进细胞死亡：在特定条件下（如三氧-化二砷治疗、神经酰胺处理），自噬与凋亡可共同促进细胞死亡。当凋亡通路受阻时，自噬可作为替代性死亡机制。相互拮抗作用：自噬通过维持细胞内稳态（如清除错误折叠蛋白、提供能量）抑制凋亡；而凋亡激活后，caspase会降解自噬关键蛋白（如Beclin-1）以终止自噬。能量支持关系：自噬产生的ATP为凋亡小体形成等过程提供能量支持...2025-11-27
核心结论：不建议重复使用完整ELISA试剂盒，但部分组件在特定条件下可有限复用。一、可尝试复用的组件（需谨慎操作）1.酶标板非关键检测时，可清洗后复用1-2次清洗方法：去离子水冲洗→0.1%SDS浸泡→超声清洗→氮气吹干风险：孔间吸附差异增大，灵敏度可能下降2.洗涤缓冲液过滤后最多重复使用2次需监测pH值和吐温20浓度二、必须一次性使用的组件标准品溶液（冻融会破坏浓度梯度）底物溶液（TMB见光分解，OPD易沉淀）终止液（强酸腐蚀孔板）生物素标记抗体（活性易衰减）三、复用建议1...