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2025-07-07
一、基本概念与来源定义:牛血清白蛋白(BovineSerumAlbumin,BSA)是从牛血清中分离的球状蛋白质,占牛血清总蛋白的50%-60%,是血浆中含量最丰-富的载体蛋白。分子特征分子量:66.5kDa(非糖基化)等电点:pH4.7-4.9消光系数:E1%=6.6(280nm)二、物理状态特性固态特性外观:白色至淡黄色冻干粉末含水量:≤5%(优质级)热稳定性:56℃下可保持10小时不变性溶液状态溶解性:极易溶于水(1mg/mL可完-全溶解)构象变化:pH聚集行为:浓度5...2025-06-30
一、植物激素概述植物激素是由植物自身合成的微量有机化合物,在极低浓度下就能产生显著的生理效应。目前公-认的六大类经典植物激素包括:生长素、赤霉素、细胞分裂素、脱落酸、乙烯和油菜素内酯。二、主要植物激素及其功能1.生长素(Auxin)代表物质:吲哚-3-乙酸(IAA)核心功能:促进细胞伸长(茎秆生长)、诱导不定根形成(扦插繁殖)、维持顶端优势(抑制侧芽)、调控向性运动(向光性/向地性)应用实例:NAA常用于果树保花保果,2,4-D用作选择性除草剂2.赤霉素(Gibberelli...2025-06-24
一、ELISA基本原理ELISA通过抗原-抗体的特异性结合,利用酶催化底物显色反应进行定量或定性分析。常见的类型包括直接法、夹心法和竞争法,但其核心步骤均依赖于以下三类关键试剂:二、核心试剂一:包被抗体/抗原——实验的“基石”作用:作为固相载体(微孔板)的固定化分子,捕获目标物。选择要点:纯度与活性:高纯度避免交叉反应,确保结合效率(建议使用单克隆抗体)。包被浓度优化:预实验确定最佳浓度(通常1-10μg/mL),浓度过高易导致空间位阻。缓冲液选择:碳酸盐缓冲液(...2025-06-18
细胞培养添加物是优化细胞生长环境的关键组分,其作用涵盖营养供给、pH稳定及代谢调控等。以下是主要添加物的分类说明:一、基础营养添加物L-谷氨酰胺作用:核心能量来源,参与蛋白质合成和核酸代谢36。缺陷:水溶液中自发降解(4℃存放1周降解50%),产生有毒氨类物质36。替代方案:GlutaMAX-I(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺):通过肽酶缓慢释放谷氨酰胺,稳定性高,避免氨毒性。D-葡萄糖作用:主要碳源,支持能量代谢。类型差异:低糖型(1g/L):适合...2025-06-10
一、明确检测目标1.检测对象是什么?明确待测物是细胞因子、激素、病毒抗体还是其他蛋白。不同试剂盒针对的抗原表位和抗体对可能不同。关键点:查看试剂盒说明书中的“检测范围”和“交叉反应”,确认是否覆盖你的目标物种和异构体(如人/小鼠/大鼠)。2.需要定量还是定性?定量试剂盒需提供标准品和标准曲线,适合精确测量浓度;定性试剂盒(如诊断用)通常只判断阴阳性。二、匹配样本类型不同样本的处理方式可能影响检测结果:血清/血浆:需避免溶血、脂血(可能引起非特异性结合)。细胞培养上清...2025-06-06
一、保存方法选择与技术参数优化1.短期保存(-80℃)冻存液配方通用型:10%DMSO+90%FBS,需预冷至4℃并与细胞悬液等体积混合低毒性型:5%DMSO+2%FBS+3%海藻糖(适用于敏感细胞)程序降温采用梯度冷冻:4℃→-20℃(-1℃/min)→-80℃(过夜)→液氮使用程序降温盒可替代梯度操作2.长期保存(液氮)气相保存温度范围:-150℃~-190℃,需配备氧浓度监测(<500ppm)液相保存采用双层冻存管(耐压>500psi),推荐CryoBox&tr...2025-05-27
一、方法学缺陷:竞争抑制法成重灾区操作时差效应:竞争抑制法(HBeAb/HBcAb检测常用)易因加样时间差异导致不-公平竞争,重复性差质量控制难点:相较于双抗体夹心法等,该模式对温育时间敏感度更高二、试剂因素:批间差异与保存条件生产波动:不同批次间活性成分浓度存在天然差异,建议选择长批号试剂储存不当:2-8℃避光保存为基本要求,反复冻融会破坏酶标记物活性(尤其HRP标记抗体)分装技巧:使用率低的试剂应分装保存,避免整盒反复冻融三、样本污染:隐形杀手清单干扰类型具体表现内源性类...