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产品型号:DB1656-QT
厂商性质:生产厂家
所在地:上海市
更新时间:2024-09-26
产品简介:
品牌 | 其他品牌 | 货号 | DB1656-QT |
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规格 | 96T | 供货周期 | 一个月 |
主要用途 | 仅供科研 |
本试剂盒应用酶联免疫竞争法测定标本中游离脂肪酸(NEFA)水平。用纯化的游离脂肪酸(NEFA)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中加入游离脂肪酸(NEFA),和HRP标记的游离脂肪酸(NEFA)抗原,使它们竞争结合,,经过洗涤后加底物TMB显色。样本颜色的深浅和样品中的游离脂肪酸(NEFA)的含量呈负相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中游离脂肪酸(NEFA)的含量。
标本要求
1.标本处理:(1)水样 采集后经 -20℃反复冻融三次,再经玻璃纤维过滤后,备查
(2)组织 样品用丁醇:甲醇:水(5:25:70 V:V:V)抽提,或按相关文献提取进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,备查
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1. 加样:分别设标准孔、空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上标准孔中加50微升,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
2. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
7. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
8. 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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