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产品型号:
厂商性质:生产厂家
所在地:上海市
更新时间:2018-11-21
产品简介:
品牌 | 其他品牌 | 供货周期 | 现货 |
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超氧化物歧化酶(SOD)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围: 0.5 U/mL - 16 U/mL
规格:96T
使用目的:本试剂盒用于测定土壤样本中超氧化物歧化酶(SOD)活性。
实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中超氧化物歧化酶(SOD)水平。用纯化的超氧化
物歧化酶(SOD)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入超氧化物
歧化酶(SOD),再与 HRP 标记的超氧化物歧化酶(SOD)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标
抗体复合物,经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并
在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的超氧化物歧化酶(SOD)呈正相关。
用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中超氧化物歧化酶
(SOD)活性浓度。
试剂盒组成
1 | 30 倍浓缩洗涤液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 终止液 | 6ml×1 瓶 |
2 | 酶标试剂 | 6ml×1 瓶 | 8 | 标准品(1600 U/L) | 0.5ml×1 瓶 |
3 | 酶标包被板 | 12 孔×8 条 | 9 | 标准品稀释液 | 1.5ml×1 瓶 |
4 | 样品稀释液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 说明书 | 1 份 |
5 | 显色剂 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 张 |
6 | 显色剂 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 个 |
标本要求
1. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2. 不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。
800U/L | 5 号标准品 | 150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液 |
400U/L | 4 号标准品 | 150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 |
200U/L | 3 号标准品 | 150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 |
100U/L | 2 号标准品 | 150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 |
50U/L | 1 号标准品 | 150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 |
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl(样品zui终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同 3。
8. 洗涤:操作同 5。
9. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
操作程序总结:
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数, 即为样品的实际浓度。
注意事项
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期
1. 试剂盒保存:;2-8℃。
2. 有效期:6 个月