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2025-12-11
固定化酶技术通过物理或化学方法将酶束缚于载体上，使其能重复使用且易于分离。常见的四种方法及其优缺点如下：1.吸附法含义：利用物理吸附力（如范德华力、氢键）或离子交换作用，将酶吸附在固体载体（如活性炭、多孔玻璃）表面。优点：操作简单、条件温和，酶活力损失少，载体可重复使用。缺点：结合力较弱，易受pH、温度或离子强度影响而解吸附，导致酶泄漏。2.共价结合法含义：通过共价键将酶蛋白的非必需侧链基团（如氨基、羧基）与载体表面的功能基团偶联。优点：结合非常牢固，酶不易脱落，稳定性好，可...2025-12-05
细胞自噬与凋亡是两种重要的细胞程序性死亡方式，它们之间存在复杂的交互调控网络，共同决定细胞的最终命运。一、交互作用方式协同促进细胞死亡：在特定条件下（如三氧-化二砷治疗、神经酰胺处理），自噬与凋亡可共同促进细胞死亡。当凋亡通路受阻时，自噬可作为替代性死亡机制。相互拮抗作用：自噬通过维持细胞内稳态（如清除错误折叠蛋白、提供能量）抑制凋亡；而凋亡激活后，caspase会降解自噬关键蛋白（如Beclin-1）以终止自噬。能量支持关系：自噬产生的ATP为凋亡小体形成等过程提供能量支持...2025-11-27
核心结论：不建议重复使用完整ELISA试剂盒，但部分组件在特定条件下可有限复用。一、可尝试复用的组件（需谨慎操作）1.酶标板非关键检测时，可清洗后复用1-2次清洗方法：去离子水冲洗→0.1%SDS浸泡→超声清洗→氮气吹干风险：孔间吸附差异增大，灵敏度可能下降2.洗涤缓冲液过滤后最多重复使用2次需监测pH值和吐温20浓度二、必须一次性使用的组件标准品溶液（冻融会破坏浓度梯度）底物溶液（TMB见光分解，OPD易沉淀）终止液（强酸腐蚀孔板）生物素标记抗体（活性易衰减）三、复用建议1...2025-11-19
一、原理与操作流程双抗体夹心法的核心在于利用两种识别抗原不同表位的抗体：1.固相抗体包被：将一种特异性抗体固定在固相载体（如聚苯乙烯微孔板）表面，形成固相抗体层。2.抗原结合：加入待测样本后，样本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗体-抗原复合物，洗涤去除未结合物质。3.酶标抗体结合：加入酶标记的第二种抗体，其与抗原的另一表位结合，形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”夹心结构。4.显色检测：加入底物后，酶催化底物产生有色产物，其光密度值与样本中抗原浓度呈正相关。二、技术优势1.高特...2025-11-13
一、操作前准备仪器预热：开机后需预热20-30分钟，确保光源稳定，避免因未预热导致数据漂移。波长校准：定期检查波长准确度，使用滤光片或标准溶液验证，确保测量波长的精确性。比色皿选择：根据测量波长选用玻璃或石英比色皿，可见光区用玻璃皿，紫外光区必须用石英皿。二、样品处理与测量比色皿使用：仅触碰毛面，透光面避免指纹污染，清洁时用镜头纸轻擦。液体装至三分之二高度，避免溢出或气泡干扰。样品放置：空白溶液调零后，再测样品，确保光路对齐。测量顺序从稀到浓，减少误差累积。测量范围：吸光度宜...2025-11-05
ELISA（酶联免疫吸附试验）是生物学和医学研究中常用的检测技术，主要包括直接法、间接法、竞争法和夹心法四种类型。每种方法都有其独特的优缺点，适用于不同的实验需求。以下是它们的详细对比：直接ELISA法原理：将抗原直接固定在微孔板上，加入酶标记的一抗进行检测。优点：操作流程简短，实验步骤少。无需使用二抗，避免了交叉反应的可能性。缺点：灵敏度较低，因为信号放大有限。一抗需要直接标记，成本较高且制备复杂。适用范围：适用于快速检测，但对灵敏度要求不高的实验。间接ELISA法原理：抗...2025-10-28
一、污染类型识别细菌污染显微镜下可见球形或杆状微生物，培养液迅速浑浊并散发异味，细胞生长停滞。真菌污染培养液保持清亮，但可见丝状或珊瑚状菌丝，细胞状态逐渐恶化。支原体感染细胞生长缓慢，出现小黑点或空泡化，但培养液无明显浑浊。黑胶虫污染显微镜下可见点状游动小体，对细胞生长影响较小，但可能干扰观察。二、清除技术方案（一）细菌与真菌污染处理抗生素处理在培养基中添加庆大霉素（50-100μg/mL）或两性霉素B（2.5μg/mL），连续处理3-5天。需注意长期使用可能影响细胞代谢。物...