您知道显色反应避光对ELISA实验的重要性吗?

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  这类反应的定性结果可以用肉眼判断。目视标本也无色或近于无色者判为阴性，显色清晰者为阳性。但在ELSIA试剂盒中，正常人血清反应后常可出现呈色的本底，此本底的深浅因ELISA试剂盒的组成和实验的条件不同而异，因此实验中必须加测阴性对照。
  阴性对照的组成应为不含受检物的正常血清或类似物。在用肉眼判断结果时，更宜用显色深于阴性对照作为标本阳性的指标。此时酶催化无色的底物有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内，阴性孔可保持无色，而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。适当提高温度有助于加速显色进行。在定量测定中，加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。
  ELISA试剂盒定性测定的显色可在室温进行，时间一般不需要严格控制，有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔的显se情况适当缩短或延长反应时间，及时判断。
  OPD底物显色一般在室外温或37℃反应20-30分钟后即不再加深，再延长反应时间，可使本底值增高。OPD底物液受光照会自行变色，显色反应结束时加入终止液终止反应。OPD产物用硫酸终止后，显色由橙黄色转向棕黄色。
  TMB受光照的影响不大，可在室温中置于操作台上，边反应观察结果。但为保证实验结果的稳定性，宜在规定的适当时间阅读结果。TMB经HRP作用后ELISA试剂盒，约40分钟显色达，随即逐渐减弱，ELISA试剂盒至2小时后即可*消退至无色。
  TMB的终止液有多种，叠氮钠和十二烷基硫酸钠等酶抑制剂均可使反应终止。这类终止剂尚能使蓝色维持较长时间不褪，是目视判断的良好终止剂。此外，各类酸性终止液则会使蓝色转变成黄色，此时可用特定的波长测读吸光值。
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