细胞核的分离提取操作步骤

一、操作步骤

1.用颈椎脱位的方法处死小白鼠后，迅速剖开腹部取出肝脏，剪成小块（去除结缔组织）尽快置于盛有0.9％NaCl的烧杯中，反复洗涤，尽量除去血污，用滤纸吸去表面的液体。

2.将湿重约1g的肝组织放在小平皿中，用量筒量取8ml预冷的0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙溶液，先加少量该溶液于平皿中，尽量剪碎肝组织后，再全部加入。

3.剪碎的肝组织倒入匀浆管中，使匀浆器下端浸入盛有冰块的器皿中，左手持之，右手将匀浆捣杆垂直插入管中，上下转动研磨3～5次，用3层纱布过滤匀浆液于离心管中，然后制备一张涂片①，做好标记，自然干燥。

4.将装有滤液的离心管配平后，放入普通离心机，以2500rpm，离心15分钟；（1）缓缓取上清液，移入高速离心管中，保存于有冰块的烧杯中，待分离线粒体用；（2）同时涂一张上清液片②做好标记，自然干燥；（3）余下的沉淀物进行下一步骤。

5.用6ml0.25mol/L蔗糖一0.003mol／L氯化钙溶液悬浮沉淀物，以2500rpm离心15分钟弃上清，将残留液体用吸管吹打成悬液，滴一滴于干净的载玻片上，涂片③，自然干燥。

6.将①、②、③涂片用l％甲苯胺兰染色后盖片即可观察。

二、结果

分别于高倍镜下观察三张涂片，描述镜下所见。

三、高速离心分离提取线粒体

1.操作步骤

① 将装有上清液的高速离心管，从装有冰块的烧杯中取出，配平后，以17000rpm离心20分钟，弃上清，留取沉淀物。

② 加入0．25mol／L蔗糖一0．003mol／L氯化钙液lml，用吸管吹打成悬液，以17000rpm离心20分钟，将上清吸入另一试管中，留取沉淀物，加入0.1ml 0．25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙溶液混匀成悬液（可用牙签）。

③ 取上清液和沉淀物悬液，分别滴一滴于干净载玻片上（分别标记④、⑤涂片），各滴一滴0.02％詹纳斯绿B染液盖上盖片染20分钟。

2.结果

油镜下观察，颗粒状的线粒体被詹纳斯绿B染成蓝绿色。

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