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细胞活化与复苏

日期:2021-05-18浏览:280次

  很多小伙伴做实验会用到细胞,那么我们在收到细胞时该如何处理呢?
  首先收到细胞株包裹时,请检查细胞株冷冻管是否有解冻情形,若有请立即通知。细胞株请尽快开始培养,或立即冷冻保存。

  细胞复苏的原则-快速融化:
必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。

 

一. 实验前准备:

1.将水浴锅预热至37℃

2.用75%酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。

3.在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等。

  二.取出冻存管:

1.根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。

2.从液氮罐中取出细胞盒,取出所需的细胞,同时核对管外的编号。

  三.迅速解冻:

1.迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻,并要不断的摇动,使管中的液体迅速融化。

2.约1-2min后冻存管内液体完全溶解,取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁,再拿入超净台内。

  四.平衡离心:

用架盘天平平衡后,放入离心机中3000r/min 离心3min

五.制备细胞悬液:

1.吸弃上清液。

2.向离心管内加入10ml培养液,吹打制成细胞悬液。

六.细胞计数:

细胞浓度以5×105/ml为宜。

七、冷冻细胞解冻程序

1.依据细胞株数据单认定之基础培养基种类、血清种类和其它认定之成份和比例,制备培养基。绝大多数之细胞均无法立即适应不同之基础培养基或不同之血清种类,若因实验需要,必须有所不同时, 务必以缓慢比例渐次改变培养基组成,确定细胞适应后,方进行所需之实验。

2.FBS(fetal bovine serum,胚牛血清),CS(calf serum, 小牛血清)和HS(horse serum,马血清),对细胞而言差异极大,请务必依据细胞株资料单认定之血清种类培养之。

3.将培养基置于37°C水槽中回温,回温后喷以70% 酒精并擦拭之,移入无菌操作台内。取出冷冻管,立即放入37°C 水槽中快速解冻,水面高度不可接近或高过冷冻管之盖沿,否则易发生污染。轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化后,以70% ethanol擦拭冷冻管外部,移入无菌操作台内。

4.依据细胞种类和浓度,于无菌操作台内取10ml培养基加至T25或T75 flask中。取出已解冻之细胞悬浮液,缓缓加入T25或T75 flask内之培养基,混合均匀,放入37°C,5% CO2培养箱培养。

5.对绝大多数细胞而言,1%以下之冷冻保护剂DMSO,不会对细胞之贴附或活化有不良影响,不需立刻由解冻细胞中去除,待第二天确定细胞生长或贴附良好后再去除即可。唯对极少数因对DMSO敏感或会造成细胞分化之细胞,需立即去除DMSO者。

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