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进行 ELISA 前制备样品的提示

日期:2021-11-04浏览:133次

样品制备方法

细胞培养物上清液

将培养基移至离心管, 4℃, 1,500 rpm 离心 10 分钟。

立即进行上清液的分装(血清)并在 -80℃ 下保存样品。尽可能减少反复冻融次数


细胞提取物

将组织培养板放置在冰上

吸出培养基并用预冷PBS 轻轻洗涤细胞一次

吸出 PBS ,加入100 mm 培养板加入0.5ml完全提取缓冲液

收集细胞至在倾斜板中,然后移至经过预冷的离心管中。

短暂涡旋后在冰上孵育 15-30 分钟

在 4℃ 下13,000 x rpm 离心 10 分钟,沉淀不溶性内容物

将上清液(这里是指可溶性细胞提取物)分装至预冷的离心管中,并于 -80℃ 保存。尽可能减少反复冻融次数。


条件培养基

将细胞接种到完全(含血清)生长培养基中,使细胞增殖达到一定的融合率。

弃去培养基,数毫升预热PBS 小心洗涤。重复洗涤步骤。

弃去PBS 洗涤液并小心加入无血清培养基。

孵育 1-2 天。

将培养基移至离心管, 4℃ 1,500 rpm 离心 10 分钟。

立即分装上清液(血清)并在 -80℃ 下保存样品。尽可能减少反复冻融次数。


乳汁

收集样品并在 4℃ 下以 10,000 x g 离心 2 分钟。

分装上清液并在 -80℃ 下保存样品。尽可能减少反复冻融次数。


血浆

将全血收集到含抗凝剂的管中,例如 BD 抗凝真空采血管(目录号:363080/363080)或添加 0.1M 柠檬酸钠至 1/10 终体积。

4℃ 3,000 rpm 离心 10 分钟。

立即分装上清液(血浆)并在 -80℃ 下保存样品。尽可能减少反复冻融次数。


尿液

收集样品并在 4℃ 下以 10,000 x g 离心 2 分钟。

等分上清液(血清)并在 -80℃ 下保存样品。尽可能减少冻融循环次数


唾液

收集样品并在 4℃ 下以 10,000 x g 离心 2 分钟。 

立即分装上清液(血浆)并在 -80℃ 下保存样品。尽可能减少反复冻融次数。


血清

将全血收集到未经处理的测试管中,或者到不含抗凝剂的管中,如 BD 血清用真空采血管(目录号:367812)。

在室温下连续孵育 20 分钟。

4℃ 3,000 rpm 离心 10 分钟。

立即分装上清液(血浆)并在 -80℃ 下保存样品。尽可能减少反复冻融次数。


组织提取物

用干净的工具解剖组织,最好在冰上、尽快进行,以防止被蛋白酶降解。

将组织置于圆底的微量离心管中,并浸入液氮中进行“速冻"。将样品保存在 -80℃ 下以便后续使用或放置在冰上进行直接匀浆。

对于约 5 mg 的组织片,可向管中添加约 300 µl 完全提取缓冲液(查看细胞/组织提取缓冲液配方),然后用电动匀浆器匀浆。

清洗刀片两次,每次清洗使用 300µl 完全提取缓冲液,然后在 4℃ 下维持恒定搅拌 2 小时(例如置于冷室中的回旋振荡器上)。

 4℃ 13,000 x rpm 离心 20 分钟。置于冰上,将上清液(这里是指可溶的蛋白质提取物)分装至新、预冷的管中并在 -80℃ 下保存样品。尽可能减少反复冻融次数。

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