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小鼠肝炎病毒抗体(MHV-Ab) 试剂盒使用方法

日期:2022-09-02浏览:341次

小鼠肝炎病毒抗体实验原理:

本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本小鼠肝炎病毒抗体(MHV-Ab水平。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被的微孔中依次加入肝炎病毒抗体(MHV-Ab),再与HRP标记的抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过*洗涤后底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的肝炎病毒抗体(MHV-Ab呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品小鼠肝炎病毒抗体(MHV-Ab浓度。

小鼠肝炎病毒抗体试剂盒组成:

1

30倍浓缩洗涤液

20ml×1

7

终止液

6ml×1

2

酶标试剂

6ml×1

8

标准品(200 ng/L

0.5ml×1

3

标包被

12孔×8

9

标准品稀释液

1.5ml×1

4

样品稀释液

6ml×1

10

说明书

1

5

显色剂A

6ml×1

11

封板膜

2 

6

显色剂B

6ml×1/

12

密封袋

1

小鼠肝炎病毒抗体标本要求 :

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

小鼠肝炎病毒抗体操作步骤:

1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

100ng/L

5号标准品

150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

50ng/L

4号标准品

150μl5号标准品加入150μl标准品稀释液

25ng/L

3号标准品

150μl4号标准品加入150μl标准品稀释液

12.5ng/L

2号标准品

150μl3号标准品加入150μl标准品稀释液

6.25ng/L

1号标准品

150μl2号标准品加入150μl标准品稀释液

 2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟   

4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外

7. 温育:操作同3

8. 洗涤:操作同5

9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.

10. 终止:每孔加终止50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)

11. 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值) 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

小鼠肝炎病毒抗体计算:

  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

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