欢迎访问上海沪鼎生物科技有限公司网站

返回首页|联系我们

全国统一服务热线:

18221656311
技术文章您当前的位置:首页 > 技术文章 > 新手快来!小鼠高密度脂蛋白(HDL)ELISA试剂盒使用手册

新手快来!小鼠高密度脂蛋白(HDL)ELISA试剂盒使用手册

日期:2022-09-28浏览:98次

【预期用途】

仅供科研使用,本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中高密度脂蛋白(HDL)含量。

【检测原理】

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠高密度脂蛋白(HDL)水平。用纯化的小鼠高密度脂蛋白(HDL)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入高密度脂蛋白(HDL),再与HRP标记的高密度脂蛋白(HDL)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的高密度脂蛋白(HDL)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠高密度脂蛋白(HDL)浓度。

1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

1图片1.png

120μmol/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

60μmol/L 4号标准品 150μl5号标准品加入150μl标准品稀释液

30μmol/L 3号标准品 150μl4号标准品加入150μl标准品稀释液

15μmol/L 2号标准品 150μl3号标准品加入150μl标准品稀释液

7.5μmol/L 1号标准品 150μl2号标准品加入150μl标准品稀释液

2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   

4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

8.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10-20分钟。

10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

注意:

1.试剂准备:试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用。准备一次实验所需要的酶标条,其它的可从微孔板上拆下,密封,按照说明书要求保存,以备下次使用。

2.加样:实验操作中请使用一次性的灭菌吸头,避免污染。加样时注意不要有气泡产生,将样品加于酶标板底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。与反应试剂加入一样,加样过程中第一个孔与最后一个孔加样时间间隔尽量小(一般控制在10 分钟以内),如果太大,将会导致不同的“预温育"时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。为了测值的准确性,推荐设置复孔进行实验。

3.温育:为防止样品蒸发,实验时请将加上盖或覆膜的酶标板置于湿盒内,以避免液体蒸发,洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态,同时应严格遵守给定的温育时间和温度。

4.洗涤:浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。充分洗涤非常重要,在每次洗涤过程中,都要将洗涤液*甩干。洗涤过程中反应孔内残留的洗涤液应在吸水纸上拍干,勿将吸水纸直接放入反应孔中吸水,同时要轻轻擦除板底残留的液体和手指印,避免影响最后的酶标仪读数。如果使用自动洗板机,请在熟练使用后再用于正式实验过程中。

5.反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化,如观察到颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强而影响酶标仪光密度读数。

6.底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。

【结果计算】

  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

图片2.png



上一篇:沪鼎生物ELISA试剂盒的保存方法

下一篇:上海沪鼎让你了解烟草花叶病毒(TMV)

企业qq 联系方式 二维码

服务热线

18221656311

扫一扫,添加微信