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甲型流感病毒抗体(Flu A-Ab)ELISA试剂盒使用手册

日期:2022-11-03浏览:109次

【预期用途】

仅供科研使用,用于检测血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液等相关样本中甲型流感病毒抗体(Flu A-Ab)的表达。

 

【检测原理】

本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中甲型流感病毒抗体(Flu A-Ab)表达。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可与样品中甲型流感病毒抗体(Flu A-Ab)相结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过che底洗涤后加底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中甲型流感病毒抗体(Flu A-Ab)的存在与否。

 

【操作步骤】

1. 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)。

2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   

4. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

8. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10-20分钟。

10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 

【注意事项】

1. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

 

2. 为免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和试管。

 

3. 要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活。  

 

4. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为630nm。

 

5. 显色时间供参考,因用户实验室条件差异,最佳显色时间会有所不同。

 

6. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸,使用时必须注意安全。

 

7. 本试剂不同批号组分不得混用。

 

8. 揭封板膜和覆盖封板膜时应避免用力过大导致液体溅出。


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