酶联免疫测定技术(ELISA)的放大系统

  酶免疫测定自20世纪70年代初创立以来，由于其具有特异、灵敏、简便、快速的特点，现已在生物医学研究领域及临床疾病的诊疗中得到了广泛的应用，相对于放射免疫测定(RIA)技术来说，EIA还有试剂半衰期长，对环境污染小，试验废物易于处理等优点，但测定敏感性一般较RIA低，于是，为提高EIA的测定敏感性，出现了众多的EIA测定放大系统，使EIA的测定敏感性赶上甚或超过了RIA。

建立正IA测定放大系统的一般原则

EIA本身是以酶[辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP)等]作标记物的，因此，EIA的测定放大始终是围绕着标记酶来作文章的，不外乎三种可能的方式：①增加标记酶的量；②非显色底物的应用；③附加一个受标记酶催化的反应系统。

一、增加标记酶的量

通过生物素／亲合素—酶或酶／抗酶复合物的间接方法，可以增加ELISA测定中最后所测定的标记酶的量。这种方法虽在一定程度上由于标记酶的聚集增加了EIA的测定敏感性，但同时有增加非特异的背景显色的可能。

二、非显色底物的应用

从酶的反应底物着手，使用具有高测定敏感性的非显色底物如荧光素或发光物，从而提高EIA的测定敏感性，这种方法的优点是不需额外的步骤及试剂制备，缺点是需要特殊的测定仪器。

三、附加一个受标记酶催化的反应系统

原始标记酶催化附加一个反应系统，如酶底物反应循环或酶级联反应，从而达到反应放大的目的。这种由数个催化反应的耦联而构建的放大系统，是酶放大的根本之所在，敏感性的提高来源于真正的信号放大，而不是简单地将一个分子转变为更多的易于测定的分子。一个适用的酶放大系统的选择除了要考虑生化因素外，最为重要的是酶及其底物的稳定性，并要易于获得，因其对试验的准确性和重复性有较大的影响。