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酶联免疫测定技术(ELISA)的放大系统

日期:2023-05-31浏览:391次

  酶免疫测定自20世纪70年代初创立以来,由于其具有特异、灵敏、简便、快速的特点,现已在生物医学研究领域及临床疾病的诊疗中得到了广泛的应用,相对于放射免疫测定(RIA)技术来说,EIA还有试剂半衰期长,对环境污染小,试验废物易于处理等优点,但测定敏感性一般较RIA低,于是,为提高EIA的测定敏感性,出现了众多的EIA测定放大系统,使EIA的测定敏感性赶上甚或超过了RIA

 

建立正IA测定放大系统的一般原则

 

EIA本身是以酶[辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP)]作标记物的,因此,EIA的测定放大始终是围绕着标记酶来作文章的,不外乎三种可能的方式:①增加标记酶的量;②非显色底物的应用;③附加一个受标记酶催化的反应系统。

 

一、增加标记酶的量

 

通过生物素/亲合素—酶或酶/抗酶复合物的间接方法,可以增加ELISA测定中最后所测定的标记酶的量。这种方法虽在一定程度上由于标记酶的聚集增加了EIA的测定敏感性,但同时有增加非特异的背景显色的可能。

 

二、非显色底物的应用

 

从酶的反应底物着手,使用具有高测定敏感性的非显色底物如荧光素或发光物,从而提高EIA的测定敏感性,这种方法的优点是不需额外的步骤及试剂制备,缺点是需要特殊的测定仪器。

 

三、附加一个受标记酶催化的反应系统

 

原始标记酶催化附加一个反应系统,如酶底物反应循环或酶级联反应,从而达到反应放大的目的。这种由数个催化反应的耦联而构建的放大系统,是酶放大的根本之所在,敏感性的提高来源于真正的信号放大,而不是简单地将一个分子转变为更多的易于测定的分子。一个适用的酶放大系统的选择除了要考虑生化因素外,最为重要的是酶及其底物的稳定性,并要易于获得,因其对试验的准确性和重复性有较大的影响。


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