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ELISA实验之细胞样本的处理方法

日期:2023-08-18浏览:371次

ELISA(酶联免疫吸附剂测定)是一种快速、灵敏、准确可靠的一种定量分析方法,样本的处理对于ELISA实验的成功有着举足轻重的作用。 利用ELISA进行检测的样本类型包括常见的血液(血清、血浆),组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清以及不常见的皮肤组织、尿液、粪便、肺泡灌洗液、唾液、脑脊液、胸腹水、前列腺液、精液、阴道分泌物等,这些样本收集的时间、处理方法和保存都会影响到ELISA实验的结果。下面就常见ELISA细胞处理方法的整理,希望对您有所帮助。

 

 

细胞样本根据目的物所在部位可选择细胞裂解液或细胞培养上清作为样本。 需要注意的是: 因该类样本干扰因素较多, 如细胞状态、 细胞数量(大于 10^6)ph(约为 7)、培养基盐离子浓度、采样时间等,所以可能存在检测不出的情况。

 

 

如果目的物是分泌型,主要在胞外,即可选择细胞培养上清作为样本,如果目的物主要存在于胞内,则建议选择细胞裂解液作为样本类型。细胞培养上清处理方法相对简单,取细胞培养上清,1000×g 离心 20 分钟,取上清即可检测。

 

 

细胞裂解液:

 

1)贴壁细胞需要先用胰酶消化,离心收集细胞(悬浮细胞可直接离心收集) ;

 

2)将收集到的细胞用冷PBS 3次;

 

3)物理方法裂解细胞(可先超声破碎细胞,再反复冻融) :

 

       ⇒ 超声破碎:取适量PBS 重悬细胞,用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂;

 

       ⇒ 反复冻融:将待破碎的细胞在-20 度以下冰冻,室温融解,反复3次,使细胞溶胀破碎;

 

4)将标本于2-8 1500×g 离心 10 分钟,收集上清备用。

 

 

一般情况下,物理方法如反复冻融,匀浆等方法会比化学方法好,因为化学方法会引入酸或碱,可能会对ELISA实验产生影响。我们也做了相关实验来评测化学提取液和洗涤剂对ELISA检测的影响,如 RIPATritonX-100NP-40SDS、脱氧胆酸钠、β巯基乙醇、DTT 和尿素。根据我们的质检结果,高浓度的洗涤剂会影响ELISA检测的终结果。然而,其效果会洗涤剂浓度的降低而减少。与其他化学裂解缓冲液相比,1%的 Triton X-100 1NP-40 ELISA检测的影响较小。如果一定要用化学提取方法的话,推荐用这两种洗涤剂来提取靶蛋白。利用化学的细胞裂解液裂解细胞,如果去污剂成分会干扰抗原抗体反应影响检测效果,推荐利用透析和超滤的方法除去去污剂成分。

 

 

处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程,由于蛋白容易变性,降解,故该过程应尽量温和。样本处理之后的储存也非常重要,尤其注意不要反复冻融,样本处理之后可分装密封保存, 4 度保存应小于 1 周,-20 度不应超过 1 个月,-80度不应超过2个月。在标本使用前应缓慢均衡至室温,不应加热使之融解。样本的处理是实验成功的第yi, ,以上就是关于常见样本处理方法的一个简述,供研究者参考。


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