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沪鼎生物|蛋白质的浓缩技术

日期:2024-03-15浏览:160次

蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段,小编给大家介绍几种常用的浓缩技术。


一、透析袋浓缩法


利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最-广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋(无透析袋可用玻璃纸代替),结扎,把高分子(6000-12000)聚合物如聚乙二醇(碳蜡)、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外,也可将吸水剂配成30%-40%浓度的溶液,将装有蛋白液的透析袋放入,吸水剂用过后,可放入温箱中烘干或自然干燥后,仍可再用。


二、冷冻干燥浓缩法


这是浓缩蛋白质的一种较好的办法,它既可以使蛋白质不容易变性,又可以保持蛋白质中固有的成分,它是在冰冻状态下直接升华去除水分。具体做法是将蛋白液在低温下冰冻,然后移置干燥器内(干燥器内装有干燥剂,如NaOH、CaCl2和硅胶等),密闭,迅速抽空,并维持在抽空状态。数小时后即可获得含有蛋白的干燥粉末。干燥后的蛋白质保存方便,应用时可配成任意浓度使用。也可采用冻干机进行冷冻干燥。


三、吹干浓缩法


将蛋白溶液装入透析袋内,放在电风扇下吹。此法简单,但速度慢,且温度不能过高。(不要超过15℃)


四、超滤膜浓缩法


此法是利用微孔纤维素膜通过高压将水分滤出,而蛋白质存留于膜上达到浓缩目的。有两种方法进行浓缩:一种是用醋酸纤维素膜装入高压过滤器内,在不断搅拌之下过滤;另一种是将蛋白液装入透析袋内置于真空干燥器的通风口上,负压抽气,而使袋内液体渗出。


五、凝胶浓缩法


选用孔径较小的凝胶,如SephadexG25或G50,将凝胶直接加入蛋白溶液中。根据干胶的吸水量和蛋白液需浓缩的倍数而称取所需的干胶量。放入冰箱内,凝胶粒子吸水后,通过离心除去。


六、浓缩胶浓缩法


浓缩胶是一种高分子网状结构的有机聚合物,具有很强的吸水性能。每克干胶可吸水120ml~150ml。它能吸收低分子量的物质,如水、葡萄糖、蔗糖、无机盐等,适宜浓缩10000分子量以上的生物大分子物质。浓缩后,蛋白质的回收率可达80%~90%。比浓缩胶应用方便,直接加入被浓缩的溶液中即可。必须注意,浓缩溶液的pH值应大于被浓缩物质的等电点,否则在浓缩胶表面产生阳离子交换,影响浓缩物质的回收率。


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