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磷脂酸(PA)ELISA试剂盒竞争法说明书

日期:2024-04-02浏览:91次

本试剂盒仅供研究使用。


使用目的:

本试剂盒用于测定样本中磷脂酸(PA)的含量。


实验原理

本试剂盒应用酶联免疫竞争法测定标本中磷脂酸(PA)水平。用纯化的磷脂酸(PA)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中加入磷脂酸(PA),和HRP标记的磷脂酸(PA)抗原,使它们竞争结合,经过che底洗涤后加底物TMB显色。样本颜色的深浅和样品中的磷脂酸(PA)的含量呈负相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中磷脂酸(PA)的含量。  


标本要求

1.标本处理: (1)水样  采集后经 -20℃反复冻融三次,再经玻璃纤维过滤后,备查

(2)组织  样品用丁醇:甲醇:水(5:25:70 V:V:V)抽提,或按相关文提取进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,备查

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。


操作步骤

1.加样:分别设标准孔、空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上标准孔中加50微升,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

2.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

3.温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟。  

4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

7.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

8.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。


计算

 以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。


注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

检测范围:

20nmol/L -900nmol/L


规格:

96份/盒


保存条件及有效期

1.试剂盒保存:2-8℃。

2.有效期:6个月


完整版说明书可咨询我司业务员。上海沪鼎生物科技有限公司是国内ELISA试剂盒优质供应商,代理销售不同ELISA试剂盒品牌的进口/国产ELISA试剂盒,专业供应科研实验所需的培养基,抗体,动物血清血浆,标准品对照品,化学试剂,酶联免疫试剂盒,白介素试剂盒,金标检测试剂盒,微生物,蛋白质,ELISA种属涵盖广,凭借多年行业经验,完善的售后服务,高质量的产品。如果您有实验上的问题欢迎来咨询。

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