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BAS与酶联免疫试剂盒的结合

日期:2024-04-26浏览:149次

BAS酶联免疫试剂盒吸附试验是ELISA的一种改良技术,将BAS,即生物素-亲和素系统引入ELISA,很大程度上提高了ELISA的灵敏度。


一、亲和素和生物素


1.亲和素:


       给动物饲喂大量卵白蛋白后,可引起生物素缺乏症,此后证明,卵白蛋白中存在一种对生物素有异常亲和力的碱性蛋白,称之为抗生物素蛋白或卵白素,均称为亲和素。亲和素存在于卵白蛋白中,故可从鸡蛋白清中提取亲和素,由四个相同的亚基组成的碱性糖蛋白,分子量6.6~6.8万,等电点为10.5,由于每个亚基都可以结合一个生物素分子,所以亲和素呈四价反应性,在血清学反应中,可以产生新的放大作用。


2.生物素:


       即维生素H,主要存在于卵黄、肾、肝等组织中,除可提取外,也能人工合成,另外在动植物体内也广泛存在,系结构简单的小分子物质,分子量244.31,它不能直接与亲和素结合,需活化后,产生生物素衍生物(即生物素酰羟基丁二酰亚胺,BNHS,为白色结晶,熔点200~202℃)才能与亲和素结合。另外,它还能高比度地偶联抗体等反应物质和酶等标记材料,分别制成生物素化抗体和生物素化酶等,在免疫反应中起到一级稳定的放大作用。


二、BAS酶联免疫试剂盒吸附试验的技术类型,该检测系统可分为以下两类:


1.BAB法:


      即以游离的亲和素分别桥联生物素化抗体和生物素化酶的检测方法。目前最-常用的是本法的改良法,预先使亲和素与生物素化酶形成复合物,再使其与生物素化抗体反应,因而叫做ABC法,此法既减少了反应步骤,又因ABC网格结构可网络数量极为可观的酶分子,从而使BAS的灵敏度又得到了进一步的提高。


2.BA法:


       即直接以酶标亲和素联接生物素化抗体,检测抗原的方法。为简化反应程序,厂家试制了酶联BAS试剂,连接被检测的免疫反应系统是生物素化抗体,即生物素化抗抗体羊抗兔和兔抗小鼠及一种生物素化抗体生物素化马抗人。较常用的生物素化酶是生物素化辣根过氧化物酶。


三、BAS ELISA在检测工作中的应用:

该技术应用最多的一个方面就是检测可溶性抗原如细菌和病毒等,以及它们相应的抗体。


1. 细菌性抗原的检测Yolken等采用双抗体夹心ABC ELISA法检测流感杆菌b型、肺炎球菌和链球菌抗原等,先用相应抗体包被酶标板,然后分别加入细菌培养上清液、生物素化抗体和亲和素与生物素化酶复合物来实施反应,本法检测的灵敏度比常规ELISA和荧光抗体法高4~16倍。

 

2. 病毒性抗原的检测病毒性抗原也可用双抗体夹心法检测,如检出粪便中的轮状病毒,可用抗体包板,再相继加入待检标本、生物素化抗体、亲和素和3H标记的生物素,然后作放射免疫测定。国内已用BAS 酶联免疫试剂盒吸附试验检测单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、肺炎病毒及其相应抗体。

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