ELISA试剂盒8大特殊样本处理方法

一、唾液样本

采集规范

空腹采集，避免进食后30分钟内取样（唾液淀粉酶含量升高干扰检测）

使用无菌唾液采集管，避免口腔黏膜细胞混入

处理流程

样本收集后立即于-70℃速冻1小时，冰上融化后10000rpm离心10分钟取上清短期保存（<7天）可置于4℃，长期需分装后存于-80℃（保存期≤2个月）

二、尿液样本

采集要求

无菌管收集中段尿，避免微生物污染

样本体积需≥50μL（适配微量ELISA试剂盒）

预处理要点

2000-3000rpm离心20分钟，取上清检测；若沉淀复现需二次离心

高浓度尿素样本建议1:5 PBS稀释后检测（降低基质效应）

三、粪便样本

均质化处理

取干燥粪便块（>50mg）与PBS按1:9（w/v）混合，冰浴超声破碎后5000×g离心10分钟

建议添加0.05M EDTA缓冲液（抑制金属蛋白酶活性）

储存规范

分装后-80℃保存≤2个月，避免反复冻融（冻融次数≤3次）

四、脑脊液样本

采集禁忌

需专业腰椎穿刺获取，避免血液污染（红细胞裂解释放血红蛋白干扰检测）

采集后30分钟内完成离心处理

离心参数

2000-3000rpm离心20分钟，取透明上清液

高脂样本需超速离心（10000×g，15分钟）去除脂蛋白干扰

五、胸腹水样本

细胞碎片清除

无菌管收集后立即离心（2000-3000rpm，20分钟）

浑浊样本可添加1% Triton X-100裂解细胞（验证对靶标无影响）

储存条件

分装后-80℃保存≤3个月，复溶时37℃水浴缓慢解冻

六、组织匀浆样本

匀浆制备规范

新鲜组织剪碎后按1:9（w/v）加入预冷PBS，冰浴匀浆至无可见颗粒

建议添加蛋白酶抑制剂（如1mM PMSF）防止靶标降解

离心参数

5000×g离心5分钟取上清，脂质层用注射器针头小心吸除

七、细胞裂解液样本

裂解关键步骤

贴壁细胞用预冷PBS清洗3次后加入RIPA裂解液（含1%蛋白酶抑制剂）

裂解后10000-14000×g离心5分钟，避免使用含SDS裂解液（干扰包被抗体）

八、精液/阴道分泌物样本

液化处理

精液样本需37℃孵育30分钟液化，4000rpm离心10分钟取精浆

阴道分泌物需2000-3000rpm离心20分钟去除上皮细胞

检测优化

高黏稠样本建议1:3 PBS稀释（降低背景信号）

验证基质效应：比较稀释样本与标准曲线斜率偏差（偏差>15%需重新处理）

科研场景关键质控点

1.抗干扰策略

高脂血症/溶血样本：超速离心（12000×g，15分钟）或脂质吸附柱预处理

蛋白酶污染风险：全程冰上操作，添加广谱蛋白酶抑制剂

2.稳定性验证

冻融实验：比较新鲜样本与冻融后样本OD值差异（CV需<10%）

长期保存：-80℃样本每2个月检测一次靶标回收率（≥80%为合格）

3.数据校准

高背景值处理：设置空白孔（仅加样本稀释液）扣除本底信号

浓度超限样本：梯度稀释后复测，选取OD值落在线性区间内的稀释度