细胞分离液的相关介绍

一、细胞分离液的工作原理‌

细胞分离液是一种基于密度梯度离心原理设计的介质，常用成分包括聚蔗糖（如Ficoll）或硅胶颗粒（如Percoll）。不同细胞因大小、密度和沉降系数差异，在离心过程中分层，从而被精准分离。

例如：外周血单个核细胞（PBMC）‌可通过Ficoll分离液与红细胞、粒细胞区分；

肿瘤细胞‌可通过特殊配方的分离液从组织碎片中富集。

二、细胞分离液的标准操作流程‌

1. 样本准备‌

血液样本需抗凝处理（如EDTA抗凝），组织样本需机械破碎或酶消化成单细胞悬液。

过滤去除大颗粒杂质（推荐70 μm滤网）。

2. 配制分离液‌

根据样本类型选择合适密度的分离液（如Ficoll-1077用于人PBMC分离）。

保持低温（2-8℃）保存，使用前恢复至室温，避免温度波动影响密度梯度。

3. 梯度离心‌

将样本缓慢叠加在分离液上层，保持分层清晰（倾斜移液管沿管壁缓慢加入）。

离心参数优化：通常400-800×g离心20-30分钟，具体根据试剂说明调整。‌离心机升/降速建议设置为“低加速度"‌，避免破坏分层界面。

4. 目标细胞收集‌

离心后，目标细胞集中于分离液与血浆/培养基的交界层（如PBMC位于Ficoll上层）。

使用无菌吸管轻柔吸取细胞层，转移至新管后用PBS洗涤2-3次，去除残留分离液。

三、细胞分离液的五大核心优势‌

高纯度与高活性‌

非特异性吸附低，细胞存活率可达95%以上，且表面抗原完整性保持良好，适用于流式分析和原代培养。

操作简便高效‌

单次离心即可完成分离，30分钟内获得目标细胞，显著提升实验效率。

广泛适用性‌

覆盖多种样本类型：血液、组织、骨髓、腹水等；兼容T/B细胞、干细胞、肿瘤细胞等多种细胞类型。

可重复性高‌

标准化试剂和流程确保实验结果稳定，减少批次间差异。

低交叉污染风险‌

化学惰性成分避免与细胞发生反应，尤其适合稀有细胞分选（如循环肿瘤细胞）。

四、关键注意事项与常见问题‌

1. 严格避免污染‌

实验全程需在超净台内操作，分离液开封后需密封保存，防止微生物污染。

注意：‌ 血液样本需按生物安全二级（BSL-2）标准处理。

2. 精准控制离心条件‌

离心力过高会导致细胞挤压损伤，过低则分层不彻-底。建议预先进行离心参数优化实验。

3. 选择适配的分离液类型‌

高密度细胞（如红细胞）选择Percoll梯度液；低密度细胞（如PBMC）选择Ficoll体系。

商品化分离液（如STEMCELL品牌）常针对特定细胞优化，可优先考虑。

4. 温度与时间控制‌

离心前样本与分离液需平衡至室温，低温会增加液体粘度导致分层异常。

细胞收集后需在1小时内进行后续实验，避免活性下降。

5. 质量验证‌

分离后建议采用台盼蓝染色评估细胞活性，流式细胞术检测纯度（如CD45+标记PBMC）。