血清中出现沉淀物的原因及避免方法

一、血清沉淀物的成因

1.脂蛋白变性

胎牛血清中的脂蛋白在温度骤变（如直接-20℃转37℃解冻）时易发生变性聚集，形成白色絮状物。研究表明，此类沉淀占解冻后沉淀总量的40%-60%。

2.纤维蛋白析出

低温采集的血清残留纤维蛋白原，解冻时转化为纤维蛋白，形成肉眼可见的1-2mm絮状物。该现象在未完-全过滤的血清批次中尤为明显。

3.磷酸钙结晶

37℃环境下磷酸钙溶解度降低，产生云雾状沉淀，显微镜下呈现布朗运动的黑点，易被误判为微生物污染。

操作因素

反复冻融导致脂质聚集

热灭活（56℃以上）引发蛋白变性

37℃长时间孵育加速沉淀生成

二、沉淀物对实验的影响评估

数据表明，90%的沉淀不影响血清功能性，但磷酸钙沉淀可能导致30%的误判污染事件。

三、标准化防控技术规范

（1）解冻操作SOP

梯度解冻法

阶段1：-20℃→4℃（16-24小时）

阶段2：4℃→室温（轻摇混匀）

禁忌：禁止直接37℃水浴解冻

离心参数优化

400g离心5分钟（沉淀物去除率>95%）

滤膜孔径≥0.22μm（避免营养流失）

（2）存储管理要点

分装冻存：单次用量分装，避免反复冻融

温度控制：-15℃~-20℃长期保存，2-8℃存储≤1个月

（3）特殊场景处理

热灭活需求：严格遵循56℃±1℃、30分钟±2分钟，全程涡旋震荡

污染鉴别：采用琼脂平板培养法替代目测观察