抗体和重组蛋白的使用及保存方法

一、抗体使用规范与保存策略

1. 接收与预处理

离心操作：4℃条件下12,000rpm离心3分钟（体积<50μl需延长至5分钟），确保管壁附着物完-全收集

分装原则：按单次使用量分装（≥10μl/份），避免反复冻融导致的活性损失

特殊类型处理：

腹水抗体需立即冻存（含蛋白酶易降解）

荧光标记抗体需全程避光操作

2. 保存条件优化

长期保存：-20℃（普通抗体）或-80℃（珍贵抗体），添加50%甘油可降低冻融损伤

短期保存：4℃不超过2周，置于冰箱内层远离除霜区

防腐措施：0.02%叠氮钠可抑制微生物生长（活细胞实验禁用）

二、重组蛋白使用规范与保存策略

1. 复溶与稀释

冻干蛋白：使用无菌水复溶，86μl水/100mg冻干粉，轻摇溶解（禁止涡旋）

溶液态蛋白：保持天然构象，避免剧烈震荡导致结构破坏

2. 保存体系构建

温度控制：-80℃保存，添加10-50%甘油增强稳定性

浓度要求：≥1mg/ml以减少管壁吸附损失

速冻技术：液氮速冻后转移至-80℃可最大限度保持活性

三、运输与稳定性保障

四、常见问题解决方案

活性下降：检查离心条件是否达标（12,000rpm），分装体积是否≥10μl

非特异性结合：优化封闭剂浓度（建议5%BSA）和洗涤次数（≥3次）

沉淀问题：调整缓冲液pH至7.2-7.4，降低盐浓度至100-150mM

五、最佳实践建议

标准化流程：建立接收-分装-使用-记录的完整SOP

温度监控：配备温度记录仪（±2℃精度）

库存管理：实施先进先出原则，定期检查试剂状态

验证测试：新批次试剂需进行活性验证（如ELISA效价检测）