细胞污染的识别与清除方法

一、污染类型识别

细菌污染

显微镜下可见球形或杆状微生物，培养液迅速浑浊并散发异味，细胞生长停滞。

真菌污染

培养液保持清亮，但可见丝状或珊瑚状菌丝，细胞状态逐渐恶化。

支原体感染

细胞生长缓慢，出现小黑点或空泡化，但培养液无明显浑浊。

黑胶虫污染

显微镜下可见点状游动小体，对细胞生长影响较小，但可能干扰观察。

二、清除技术方案

（一）细菌与真菌污染处理

抗生素处理

在培养基中添加庆大霉素（50-100μg/mL）或两性霉素B（2.5μg/mL），连续处理3-5天。需注意长期使用可能影响细胞代谢。

物理清除

对污染严重的细胞系，建议弃用并彻-底消毒培养箱（75%酒精擦拭+紫外线照射），更换水盘为饱和硫酸铜溶液。

（二）支原体清除方案

专用培养基

使用含Plasmocin的支原体清除培养基，处理周期需持续2-3周。

联合处理

结合四环素类抗生素（10μg/mL）与细胞冻存复苏，通过低温冲击清除顽固支原体。

（三）管路系统污染防控

生物膜清除

采用复合型过氧化氢（H2O2）溶液循环冲洗管路，3-5分钟可穿透生物膜结构，杀灭铜绿假单胞菌等顽固微生物。

长效抑菌

处理后在管路内壁形成纳米级抑菌层，有效降低气溶胶传播的霉菌污染风险。

三、预防体系构建

三级细胞库管理

建立主细胞库（MCB）、工作细胞库（WCB）和实验细胞库（ECB），每代次进行支原体PCR检测。

操作规范

严格执行双人核对制度，超净台内物品摆放不超过工作区1/3面积，定期更换HEPA滤膜。

环境监测

每周对培养箱、超净台进行沉降菌检测，保持相对湿度<60%以抑制真菌繁殖。