为什么双抗体夹心法是检测抗原的常用方法

一、原理与操作流程

双抗体夹心法的核心在于利用两种识别抗原不同表位的抗体：

1.固相抗体包被：将一种特异性抗体固定在固相载体（如聚苯乙烯微孔板）表面，形成固相抗体层。

2.抗原结合：加入待测样本后，样本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗体-抗原复合物，洗涤去除未结合物质。

3.酶标抗体结合：加入酶标记的第二种抗体，其与抗原的另一表位结合，形成“固相抗体-抗原-酶标抗体"夹心结构。

4.显色检测：加入底物后，酶催化底物产生有色产物，其光密度值与样本中抗原浓度呈正相关。

二、技术优势

1. 高特异性双重验证

两种抗体需同时识别抗原的不同表位，显著降低交叉反应风险。

适用于多价抗原（如蛋白质、细胞因子），可排除单表位干扰。

2. 高灵敏度信号放大

酶标记抗体催化底物显色，信号强度远高于直接检测法。

可检测低浓度抗原（如pg/mL级），适用于临床样本分析。

3. 广泛适用性

适用于二价及以上大分子抗原（如乙肝表面抗原、肿瘤标志物）。

通过优化抗体对，可检测多种生物标志物。

三、应用场景

1. 临床诊断

传染病检测：如乙肝表面抗原（HBsAg）、HIV抗体确认。

肿瘤标志物：如甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）定量。

2. 生物研究

细胞因子分析：如IL-6、TNF-α的浓度测定。

药物开发：抗体药物效价评估。

3. 食品安全

过敏原检测：如花生蛋白、麸质残留筛查。

四、局限性及解决方案

1. 钩状效应（Hook Effect）

现象：高浓度抗原导致固相抗体与酶标抗体结合受阻，出现假阴性。

对策：样本稀释后复测，或采用一步法优化。

2. 小分子抗原限制

原因：半抗原（如激素、药物）仅有一个表位，无法形成夹心结构。

替代方案：采用竞争法检测小分子。

3. 干扰因素

类风湿因子（RF）：可能桥接固相抗体与酶标抗体，导致假阳性。

抗动物抗体（HAAA）：干扰酶标抗体结合。

解决方案：使用抗干扰试剂或优化洗涤步骤。

五、技术比较