乳酸脱氢酶基本化学反应及常见测试办法

乳酸脱氢酶基本化学反应及常见测试办法 
  乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以肾脏含量较高。乳酸脱氢酶是能催化乳酸脱氢丙酮酸的酶，几乎存在于所有组织中。同功酶有五种形式，即LDH－1（H4）、LDH-2（H3M）、LDH－3（H2M2）、LDH-4（HM3）及LDH-5（M4），可用电泳方法将其分离。LDH同功酶的分布有明显的组织特异性，所以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病。正常人血清中LDH2，>LDH1。如有心肌酶释放入血则LDH1>LDH2，利用此指标可以观察诊断心肌疾病。

  英文名称：LAD；LDH；Lactic dehydrogenase（rabbit muscle）
其他名称：L-乳酸脱氢酶；乳酸去氢酵素
CAS号：9001-60-9

级别：BR
分子量：约36000
活力：≥300u/mg protein

活力定义：One unit will reduce 1.0 μmole of pyruvate to L-

lactate per min at pH 7.5 at 37℃
浓度：≥5000u/ml
性状：悬浮液。酶反应：乳酸盐+辅酶I＝丙酮酸盐+还原辅酶I+H+ 。等

电点pI 4.6。在25℃,pH 5.0～11.0时稳定；在pH小于5时,120分钟后没

有活力（放置同样时间,在pH 5.0时有100%活力,在pH 6.0时有84%活力）
用途：生化研究。丙酮酸盐的检定
保存：2～8℃
乳酸脱氢酶（1actate dehydrogenase，LDH）是辅酶I（NAD）依赖性脱氢酶，能氧化乳酸为丙酮酸，为无氧糖酵解途径的标志酶。硝基蓝四唑盐法显示LDH活性的原理与显示SDH活性的原理基本相同，只是需加用NAD，氢从反应的还原型辅酶I（NADH）传递给四唑盐，将其还原为甲脂。
 
    1）孵育液配制
    0．06mol/LPBS           0．25ml
    1．0mol/LD，L乳酸钠     0．1ml
    0．4％NAD              0．1ml
    0．4％NBT               0．25ml
    0．1mol/LKCN            0．1ml
    0．5mol/LMgCl：          0．1ml
    蒸馏水                   10ml
 
    2）操作程序：
    ①固定：用预冷的2％多聚甲醛（0．1mol/LPBS，pH 7．4配制）灌注固定5分钟；
    ②洗涤：用冷PBS灌流冲洗固定液；
    ③取材：取所需组织，用PBS洗3次；
    ④切片：冰冻切片或振动切片，裱于涂有黏附剂的载玻片上：
    ⑤孵育：在上述孵育液中，暗处反应5分钟，室温下反应30分钟；
    ⑥封片：洗涤、脱水、甘油明胶封固和镜检。
 
    3）结果：酶反应阳性部位呈蓝色。该酶对固定剂的耐受性较好，采用先固定后孵育，可保存结构防止酶扩散。为了防止定位异常，在底物中加入聚乙烯醇（PVA）或聚乙烯吡咯烷酮（PVP），可使底物黏稠度增加，防止反应产物扩散。
 
    4）对照实验：除去孵育液中的底物，结果应为阴性。

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