华东师范大学朱同学来电咨询技术问题

      华东师范大学朱同学说：做了十多次的Elisa，能够得到线性比较好的标准曲线，但是同样浓度的标准品每次的OD值都不一致，样品就更加惨不忍睹了，除了酶标板之外，其余封闭蛋白，抗体，抗体稀释度，等等条件都已经更换过，但是问题还是没能解决，怀疑是酶标板的问题。有什么方法可以快速验证酶标板的可靠性。
      钱分析：elisa本身灵敏性很高，每次做出来的值不一样很正常，特别是od值比较大的时候更是差别很大，但是只要不要偏差太大就好，一般偏差要求10%内吧，好的数据是3%内。首先要稳定所有的条件，不同的条件下做的板子读值不一样很正常。在同样条件下同批次的板子，如果测定不一样，就是包被问题或者保护剂的问题，但这两个都是各个试剂盒的机密，看看文献里别人怎么做的。其次每次实验的标曲上同一浓度样品的OD值不一样是很正常的，这与抗原抗体反应体系、作用时间、显色时间等等一系列的因素有关。鉴定该ELISA体系是否可靠，zui关键的指标是加标回收率和稀释线性，如果你怀疑的话可以做一下。一般来说，国外厂商的ELISA试剂盒是没有问题的。同时你还要看一下说明书中ELISA试剂盒的灵敏度，如果你的样品浓度低于该检测下限，则无法检测到，这是很正常的现象，并不是非要每个样品都要测出值才可以。

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