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大鼠ELISA试剂盒的样品处理注意要点及操作步骤

日期:2016-07-25浏览:1010次

    大鼠ELISA试剂盒加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器,使加液过程迅速完成。应当注意以下几点

1.血清:
标本请于室温放置2小时或4℃过液后于1000g,4℃离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
2.细胞培养物上清:
细胞培养物于室温1000g,离心10分钟后收集上清,并将标本保存于-20℃,且应避免反复冻融。
3.组织匀浆:
将组织标本先用PBS洗涤,除去多余血液,匀浆化后放在PBS于-20℃放置过液,再经过二次反复冻融破膜,5000g,4℃离心5分钟,取上清即可检测。
4.血浆:
ELISA试剂盒可用EDTA或肝素作为抗凝剂标本采集后30分钟内于2-8℃,1000g离心15分钟,小鼠ELISA试剂盒或将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
5.尿液:
无菌收集取初尿,离心除去沉淀物,即可用于检测,要长期保存尿样,可以加入0.05%的NaN3在4-8℃保存,或加入尿样冰冻保护液放入-20℃冰箱长期保存。

操作步骤:

1.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
2.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  
3.配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
4.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
5.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
6.温育:操作同3。
7.洗涤:操作同5。
8.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
9.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
10.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

            

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