沪鼎生物与您雨日畅谈抽提蛋白质的那十一个环节

    坐在窗子旁边能听见雨水滴落的声音，又近乎中午，仿佛今天才刚刚开始。也就是差不多一个小时前，王接到了技术人员发来的邮件，这是一个实验的过程。您看到本文的标题定知晓是什么实验了，下面我们就进入今天的主题来说，沪鼎生物与您雨日畅谈抽提蛋白质的那十一个环节。
    在步骤环节之前，这里先跟您简略的说明一下，蛋白质在细菌中表达后，以反复的冷冻-解冻方法打破细胞，再用硫酸铵把蛋白质沉淀下来，此步骤可以去除大部份核酸、多醣、脂质等杂物。那么实验的那十一个步骤是怎么样的？
    1、挑取培养皿上单一菌落，培养在15 mL 的LB/amp/kan 液体培养基中，以120 rpm 转速震荡，在37℃下培养经过一个晚上。
    2、取上述菌液6 mL加入300 mL新鲜LB/amp/kan培养基中，以120 rpm 37℃培养至A600 = 0.6 后，加入IPTG成为1 mM浓度，继续以120 rpm在37℃震荡培养4 h。 
    3、将菌液倒入50 mL 离心管 （conical tube） 中离心10 min （5 000 rpm）。
    4、倒去上清，可将菌块连同离心管置 -20℃冰箱贮存。
    5、取出含菌块的离心管置碎冰上，待菌块溶解后，以残存液体均匀悬浊的。再加入10 mL lysis buffer 轻轻悬浮的。 
    6、将菌液放在液态氮中冷冻1 min,然后在37℃水浴中摇荡溶解的。如此反复三次，尽量不要产生大量气泡。将离心管的内容物倒入50 mL 高速离心机的离心管内。
    7、离心20 min （12 000 rpm，4℃） 取上清共 _____ mL，称为 粗抽取液 （XT）；预留100 μL 以便日后一起进行分析。此后样本均得放置碎冰上，以低温进行实验。
    8、此上清加入5 mL buffer A-0 混匀后倒入烧杯，置碎冰上放冷，不时搅拌并缓缓加入固体硫酸铵 _____ gm,使成为70%饱和度，加完后再搅拌10 min。
    9、离心20 min （12 000 rpm，4℃） 后小心倒去上清，取白色沉淀部份。
    10、沉淀加以2 mL buffer A-150 均匀悬浊的，再以桌上型离心机去除不溶物质，（10 000 rpm，5 min），共得 ______ mL，称为 全蛋白质 （TP）；预留100 μL,连同上述XT 置4℃冷藏。
    11、其余溶液部份准备进行胶体过滤层析，标示清楚后置4℃冷藏。
    以上就是实验的十一个步骤，沪鼎生物感谢您的支持！二月尾巴啦，需要购买产品的朋友们抓紧来电哦！因为我公司的近期*还在进行中，会送小礼物哦。实验已经结束了，您一定想知道，实验中需要用到哪些仪器与试剂呢？上海沪鼎还特别为您整理出了仪器试剂等数据列表。
    恒温震荡培养箱37℃；高速冷冻离心机及离心管 （使用20,000 rpm离心陀）使用高速离心机要注意： 离心机及离心陀的温度要预冷*，相对位置的两只离心管要平衡好，离心陀转速不能超过zui高速限；液态氮及冰筒；37℃温水浴。 
    需要用到的试剂有：LB amp kan液体培养基、IPTG、Na3PO4·12H2O、NaCl、EDTATriton、X-100液氮。上海沪鼎生物的产品价格是保证的哦！并且有，购买我公司试剂在实验过程中如果遇到了不懂的问题可电询。