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干货:人2A(PP2A)试剂盒使用手册来啦!

日期:2022-06-10浏览:290次

【预期用途】

人2A(PP2A)仅供科研使用,本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中蛋白磷

酸化酶2A(PP2A)活性。


【检测原理】

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人蛋白磷酸化酶2A(PP2A)水平。用纯化的人蛋白磷酸化酶2A(PP2A)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入蛋白磷酸化酶2A(PP2A),再与HRP标记的蛋白磷酸化酶2A(PP2A)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的蛋白磷酸化酶2A(PP2A)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人蛋白磷酸化酶2A(PP2A)活性浓度。


【产品性能】

1、物理性能试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装,无破损漏气(如有漏气,不影响使用)。

2、剂量反应曲线线性标准品剂量反应曲线相关系数r值,大于等于0.9900。

3、检测范围

1.2U/L -45U/L。

4、灵敏度

检出剂量不能小于0.3U/L 。

5、精密度

精密度用样品测定值的变异系数CV 表示。CV(%) = SD/mean×100批内差:取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测,每份样本连续测定20 次,分别计算不同浓度样本的平均值及SD 值。批间差:选取3 个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本进行定量测定,每个样本使用同一试剂盒重复测定10 次,分别计算不同浓度样本的平均值及SD 值。批内差: CV<5.9%批间差: CV<8.1%6、回收率分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围和平均回收率。

7、线性

分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍,4倍,8倍,16倍做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。


8、特异性

本试剂盒识别天然和重组 人蛋白磷酸化酶2A(PP2A),经检测与其它相似物质无明显交叉反应。由于受到技术及样本来源的限制,不可能完成所有相关或相似物质交叉反应检测,因此本试剂盒有可能与未经检测的其它物质有交叉反应。

9、稳定性

经测定,试剂盒在有效期内务必按推荐温度保存,活性降低率小于5%。为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响,实验室的环境条件需尽量保持一致,尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来

进行操作可减少人为误差。


【操作步骤】

1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。





2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。


3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  


4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。


5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。


6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。


7.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。


8.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。


9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10-20分钟。


10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。


11.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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