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鱼金属硫蛋白(MT)ELISA实验说明

日期:2024-06-26浏览:197次

检测范围:

 50pg/ml - 3500pg/ml

 

使用目的:

本试剂盒用于测定鱼血清、血浆及相关液体样本中金属硫蛋白(MT)含量。


实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鱼金属硫蛋白(MT)水平。用纯化的鱼金属硫蛋白(MT)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入金属硫蛋白(MT),再与HRP标记的金属硫蛋白(MT)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻-底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的金属硫蛋白(MT)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中鱼金属硫蛋白(MT)浓度。

 

标本要求

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。


操作步骤

1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

3200 pg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

1600pg/ml 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

800pg/ml 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

400pg/ml 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

200pg/ml 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   

4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.温育:操作同3。

8.洗涤:操作同5。

9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.

10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。


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